تکنیک های سلولی و مولکولی مورد استفاده در مراکز تحقیقاتی

[هیوا]

تصویری از دستگاه PCR



انواع PCR :

بمنظور نتيجه گيري بهتر، غير از PCR معمولي روش هاي جديدي از PCR ارائه شده است كه به صورت اجمالي به برخي از آنها اشاره مي شود.



1- آر تي _ پي سي آر (RT-PCR)
(Reverse Transcriptase-PCR)
الگوي اوليه در RT-PCR، مولكول RNA تك زنجيره اي است. از آنجائيكه DNA پليمراز قادر به استفاده از RNA بعنوان الگو نمي باشد، مرحله ديگري به PCR اضافه شده است. طي اين مرحله، با استفاده از آنزيم رورس ترانس كريپتاز (Reverse Transcriptase) RT ، از الگوي RNA، مكمل آن DNA‌C (complementary DNA)
سنتز مي شود و بوسيله تكنيك PCR تكثير مي يابد. بمنظور تعيين گونه و حساسيت دارويي در ويروس شناسي و مايكوباكتريولوژي، از اين روش براي تكثير RNA ريبوزومي استفاده مي شود.



2- نستد – پي سي آر (Nested-PCR)
در اين روش بمنظور افزايش حساسيت PCR از دو جفت پرايمر استفاده مي شود. ابتدا با يك جفت پرايمر اول در طول 30-15 چرخه، قطعات مشخصي از DNA هدف تكثير مي يابند. سپس محصول PCR حاصل به لوله ديگري منتقل شده و بعنوان الگو استفاده مي شود و بوسيله جفت پرايمرهاي دوم مرحله دوم PCR انجام مي شود.



3 - مالتيپلكس – پي سي آر
(Multiplex-PCR)
در اين روش از چند جفت پرايمر اختصاصي براي هدف هاي مختلف استفاده مي شود. در ميكروب شناسي باليني، با استفاده از اين روش امكان شناسايي چندين عامل بيماري در يك نمونه بطور همزمان وجود دارد و مي توان عفونت هاي مخلوط را تشخيص داد.



آرمز – پي سي آر (ARMS-PCR)
(Amplification Refractory Mutation System-PCR)
روش آرمز _ پي سي آر (ARMS-PCR) براي تشخيص موتاسيون هاي نقطه اي بكار مي رود و از دو جفت پرايمر استفاده مي شود. در اين روش، واكنش در دو لوله جداگانه انجام مي شود كه يكي از آنها حاوي پرايمرهاي نوع موتاسيون يافته و ديگري حاوي پرايمرهاي نوع معمولي است. چنانچه تكثير در لوله حاوي پرايمر موتاسيون يافته انجام شود، در DNA هدف، موتاسيون اتفاق افتاده است و تكثير در لوله حاوي پرايمر معمولي، نشان دهنده آن است كه موتاسيوني اتفاق نيفتاده است. از اين متد مي توان در تشخيص موتاسيون هاي مولد مقاومت دارويي در باكتري‌ها استفاده كرد.